• zi::

Acest produs a fost adăugat cu succes în coș!

Vezi coșul de cumpărături

ADN polimerază Phanta Max Super-Fidelity P505

ADN polimerază Phanta Max Super-Fidelity P505

SKU: #001 -În stoc
USD$0,00

Vă rugăm să faceți clic pe întrebare pentru a obține preț și informații suplimentare.

Anchetă

Faceți clic și trimiteți întrebarea dvs. și vă vom contacta în termen de o zi lucrătoare

Detaliile produsului

Note de aplicare

Recenziile clienților

Etichete de produs

Introducerea Produsului

Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase este o enzimă superioară de nouă generație bazată pe Phanta DNA Polymerase.În comparație cu generația anterioară, Phanta Max a adăugat factorul unic de alungire, factorul de creștere a specificității și factorul anti-inhibitor al fazei de platou, care îmbunătățește considerabil capacitatea de amplificare a fragmentului lung, specificitatea de amplificare și randamentul de amplificare.Phanta Max poate amplifica eficient până la 40 kb șabloane simple (de exemplu λDNA, plasmide), șabloane complexe de 20 kb (de exemplu, ADN genomic) și 10 kb ADNc.Rata de eroare de amplificare a Phanta Max este de 128 de ori mai mică decât cea a ADN polimerazei Taq convenționale și de 6 ori mai mică decât cea a ADN polimerazei Pfu.În plus, Phanta Max are o rezistență bună la inhibitorii PCR și poate fi folosit pentru amplificarea directă PCR a bacteriilor, ciupercilor, țesuturilor vegetale, țesuturilor animale și chiar a probelor de sânge integral.Phanta Max conține doi anticorpi monoclonali care inhibă activitatea polimerazei 5'→3' și activitatea exonucleazei 3'→5' la temperatura camerei, ceea ce îi permite să efectueze PCR cu pornire la cald cu mare specificitate.Produsele de amplificare au capete tocite, care sunt compatibile cu kiturile de clonare ClonExpress și TOPO (Vazyme #C112/C113/C115/C601).

Citare

Avantajele produsului

Fidelitatea este de 128 de ori mai mare decât a Taq DNA Polymerase;

Viteza de amplificare este de 4-150 de ori mai mare decât a polimerazei convenționale;

Sistemul de buffer optimizat este aplicabil pe scară largă la diferite șabloane;

Premix gata de utilizare, minimizând etapele experimentale

Componente

componente P505

Depozitare

Depozitați la -30 ~ -15℃ timp de până la 18 luni și transportați la ≤0℃.

▲ Evitați înghețarea și decongelarea repetată.

FAQ

Î1: Eficiența de amplificare este scăzută și nu există benzi amplificate în grupul de testare.

A1: (1) Grunduri

Verificați dacă grundurile sintetice s-au degradat din cauza depozitării necorespunzătoare;revizuiți designul primerului și utilizați BLAST pentru a examina specificitatea primerului sau reproiectați primerii.

(2) Șablon

Depozitarea pe termen lung sau ciclurile repetate de îngheț-dezgheț vor duce la ruperea, tăierea sau degradarea ADN-ului, așa că șablonul ar trebui să fie ADN-ul dublu catenar proaspăt preparat.Un conținut excesiv de mare de GC în șablon va face dificilă separarea duble catenelor de ADN;în acest caz, adăugați PCR Enhancer (nr. cat. P021) pentru a reduce în mod eficient temperatura de topire.Șabloanele de probă brută pot conține inhibitori, de aceea se recomandă scăderea concentrației șablonului (utilizați după diluare; dacă se folosește o frunză de plantă, asigurați-vă că planta nu este bogată în polizaharide sau polifenoli, luați o frunză proaspătă, tânără și tăiați-o. la dimensiunea capătului unui vârf de pipetă galben).Dacă se utilizează cADN, verificați puritatea și integritatea ARN-ului utilizat pentru transcrierea inversă.

(3) Enzimă

Enzima folosită în reacție a fost inactivată.Repetați experimentul cu o enzimă proaspătă sau o enzimă dintr-o altă sursă.

(4) Sistem de amplificare

Sistemul de reacție a fost pregătit incorect.Repetați experimentul cu sistemul corect.

(5) Program de reacție

Verificați dacă temperatura de denaturare este corectă și dacă temperatura afișată pe sistemul PCR este aceeași cu temperatura reală.Dacă temperatura este prea mare, enzima va fi rapid inactivată în primele câteva cicluri.Dacă temperatura este prea scăzută, șablonul nu va fi complet denaturat.Dacă drojdia este utilizată ca șablon, timpul de pre-denaturare poate fi prelungit la 10 minute.Dacă temperatura de recoacere este inadecvată, determinați temperatura de recoacere corespunzătoare testând un gradient de temperaturi de recoacere.Dacă fragmentul țintă este lung, încercați programul PCR de touchdown.Verificați dacă timpul de prelungire este suficient.

 

Î2: Benzile amplificate sunt slabe.

A2: (1) Grunduri

Verificați dacă primerii sintetici s-au degradat.

(2) Șablon

Verificați calitatea șablonului.Depozitarea pe termen lung sau ciclurile repetate de îngheț-dezgheț vor duce la ruperea, tăierea sau degradarea ADN-ului, astfel încât ADN-ul dublu catenar proaspăt preparat ar trebui utilizat ca șablon.Dacă șablonul a fost epuizat, utilizați diluții în serie ale produsului de amplificare inițial ca șabloane pentru amplificarea ulterioară.

(3) Program de reacție

Încercați programul PCR de touchdown;crește timpul de prelungire și numărul de cicluri.

 

Î3: Specificitatea de amplificare este slabă sau există produse nespecifice.

A3: (1) Grunduri

Designul grundului nu este optim.Dacă primerii s-au legat de situsuri nespecifice din secvența țintă sau unul de altul pentru a forma dimeri, optimizați prin reducerea concentrației de primer sau reproiectând primerii dacă este necesar.

(2) Șablon

Dacă șablonul este impur sau contaminat, pregătiți un nou șablon.

Dacă șablonul s-a degradat sau a fost folosit prea mult șablon, examinați integritatea și concentrația șablonului prin electroforeză și purificați șablonul din nou, dacă este necesar.Consultați Instrucțiunile de utilizare pentru valoarea introdusă a șablonului.

(3) Program de reacție

Programul de reacție nu este optim.Dacă există benzi diverse nespecifice mai mici decât banda țintă, creșteți temperatura de recoacere și reduceți numărul de cicluri.Dacă există benzi diverse nespecifice mai mari decât banda țintă, reduceți timpul de extindere și numărul de cicluri.

 

Î4: Benzile sunt difuze sau mânjite atunci când produsele de amplificare sunt rulate pe un gel.

A4: (1) Gel

Topiți complet gelul în timpul preparării.

(2) Grunduri

Verificați dacă amorsele s-au degradat.

(3) Șablon

Șablonul este degradat sau excesiv.Examinați integritatea și concentrația șablonului prin electroforeză și pregătiți un nou șablon dacă este necesar.Consultați Instrucțiunile de utilizare pentru valoarea introdusă a șablonului.Dacă banda țintă este lungă și cADN-ul este utilizat ca șablon, verificați puritatea și integritatea ARN-ului utilizat pentru transcrierea inversă și efectuați din nou transcrierea inversă fără primeri aleatori.

(4) Program de reacție

Programul de reacție nu este optim.Dacă temperatura de recoacere este inadecvată, determinați temperatura de recoacere corespunzătoare testând un gradient de temperaturi de recoacere.Încercați programul PCR de touchdown.

 

Î5: Există produse de amplificare în grupul martor de control (NTC).

A5: (1) Proiectare problematică a grundului

Secvența amplificată este omoloagă cu secvența non-țintă.Astfel, secvențele non-țintă sunt, de asemenea, amplificate în PCR.

(2) Dacă banda corespunzătoare produsului de amplificare are aceeași dimensiune cu benzile țintă, aceasta indică contaminare.

Repetați experimentul cu un amestec proaspăt, apă sau grunduri.Pregătiți sistemul de reacție pe un banc de lucru ultra-curat pentru a minimiza contaminarea cu aerosoli.

(3) Pentru a evita contaminarea încrucișată a secvenței țintă de către genom sau fragmente mari, efectuați pașii cu grijă pentru a preveni pipetarea secvenței țintă în pipeta de încărcare sau scurgerea din tuburile de centrifugă.

(4) Pentru a evita contaminarea genei țintă cu fragmente mici de acid nucleic în aer, utilizați metoda PCR imbricată pentru a reduce sau a elimina contaminarea.

 

Î6: Polimeraza de înaltă fidelitate are o fidelitate slabă și introduce mutații.

A6: Mutațiile în PCR de înaltă fidelitate pot fi analizate din următoarele aspecte:

(1) Există mutații în șablon.

Verificați dacă șablonul este mutat.Dacă este o plasmidă, trimiteți-o pentru secvențiere.Dacă este ADNc, repetați testul;dacă mutația este încă prezentă, pot exista probleme cu ADNc.În acest caz, se recomandă prepararea de ADNc noi după verificarea integrității și purității ARN-ului.

(2) Mutația poate rezulta din expunerea prelungită a șablonului la lumina UV.

Evitați expunerea prelungită la UV în timpul extracției gelului.

(3) Secvența genei este incompatibilă cu secvența NCBI.

Retrimiteți ADN-ul pentru secvențiere.Dacă rezultatul rămâne același, înseamnă că secvența poate fi inconsecventă cu cea listată pe NCBI.

(4) Secvențe recombinante similare duc la recombinare greșită.

 

Î7: Câte șabloane ar trebui introduse dacă produsul de transcripție inversă ADNc este utilizat ca șablon pentru PCR de înaltă fidelitate?

A7: Cantitatea de intrare a șablonului de ADNc recomandată în Instrucțiunile de utilizare este de 1–5 μl (nu mai mult de 1/10 din volumul total al sistemului PCR).Determinați cantitatea de intrare adecvată testând diferite cantități de șablon în acest interval.

 

Î8: Produsele de amplificare obținute cu polimeraze de înaltă fidelitate au cozi poli(A)?Cum se adaugă cozi poli(A)?

A8: (1) Produsele de amplificare obținute cu polimeraze de înaltă fidelitate nu au cozi poli(A).Pentru clonarea ulterioară, încercați produsul de clonare fără sudură de la Vazyme C601;pentru clonarea TA, adăugați o coadă poli(A) folosind o polimerază Taq universală:

Metoda de decantare Poly(A): sistem de 10 μl numai cu polimeraza Taq:

1 μl de 10 × Taq Buffer (conținând MgCl2)

0,5 μl de 10 mM dNTPs

0,2 μl de ADN polimerază Taq (fără primeri)

1 – 7 μl de fragmente PCR purificate

Adăugați ddH2O până la 10 μl

Sistemul de amestec Taq:

2 × Taq Master Mix 5 μl

Fragmente PCR purificate 1 – 7 μl

ddH2O 10 μl

Condiții de reacție: 72°C 10 min.

Pisică.Nu.:
--- Te rog selecteaza ---

Note de aplicare Rezumat

Citeşte mai mult

Scrie o recenzie aici:

  • 1 stea2 stele3 stele4 stele5 stele(Fără evaluări încă)
    Se încarcă ...Se încarcă ...

  • nouă − 5 =

    Etichete:, , , , , , , , ,

    Clienții au cumpărat și: