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Molecular Research

Drug Discovery

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2 ×Vazyme LAmp Master Mix

2×VazymeLamp®MasterMix  长距离PCR的明灯  高效扩增>20kb的基因组、cDNA片段极高的扩增灵敏度,对于低纯度模板具有很强的耐受度广泛的GC适应性 提供即用型的预混液,最大程度地减少实验步骤   图一极高的扩增性能以10ng不同种属的基因组DNA为模板,用VazymeLAmp® DNAPolymerase扩增长度为3.6-21.0kb的目的片段。 M.DL15000Ma
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2 ×Vazyme LAmp® Master Mix

长距离PCR 的明灯

高效扩增>20 kb 的基因组、cDNA 片段

极高的扩增灵敏度,对于低纯度模板具有很强的耐受度

广泛的GC 适应性

提供即用型的预混液,最大程度地减少实验步骤

图1. 极高的扩增性能

以10 ng不同种属的基因组DNA为模板,用Vazyme LAmp® DNA Polymerase扩增长度为3.6-21.0 kb的目的片段。

M. DL15000 Marker(Vazyme #MD103)

图2. 超强的扩增灵敏度

以500 ng-0.5 ng 的棉花基因组DNA 为模板,扩增11.5kb、17.2 kb 的片段。PCR 反应结束后取10 ul 进行电泳检测。

图3. 广泛的模板适用性

以10 ng 人、水稻、大豆、棉花基因组DNA为模板,扩增3.6 kb-21 kb 的片段,PCR 反应结束后取10 ul 进行电泳检测。

图4. 广泛的GC含量适应性:可以扩增GC含量27%至78%的不同片段

以10 ng的人基因组为模板,用Vazyme LAmp® DNA Polymerase分别扩增GC含量27%至78%的不同片段。

Vazyme LAmp® DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’→5’外切酶活性的蛋白组成的混合酶,保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合特别优化的缓冲体系,Vazyme LAmp® DNA Polymerase非常适合长片段的扩增,可从基因组中扩增长达21kb的 片段,并且对不同来源、不同长度的模板均具有很高的扩增效率。PCR产物的3’端带A,可克隆至T载体。附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

组分

P311-01

P311-02 

P311-03

2 × Vazyme LAmp® Master Mix

1ml

5ml

15ml

-20℃保存。

Keyword:
P311-01/02/03
长距离PCR的明灯
长距离PCR的明灯
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Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。

A1:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021),可以有效降低解链温度;模板的GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件;模板中存在抑制物,特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果,建议稀释使用或重新制备;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度,逆转录时只用引物Oligo dT。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活,建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误,建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活;温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度。检测延伸时间是否充足。

(6) Mg2+浓度不合适

Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败;Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,应适当调整Mg2+浓度。

Q2:模板是cDNA,可以用来扩长片段吗?

A2:可以,但要保证cDNA确实有这样的长度,即RNA质量必须要好,逆转录时只用引物Oligo dT。

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