• den::

Tento produkt byl úspěšně přidán do košíku!

Zobrazit nákupní košík

2 × Phanta Max Master Mix (Dye Plus) P525

2 × Phanta Max Master Mix (Dye Plus) P525

SKU: #001 -Na skladě
USD $0,00

Kliknutím na dotaz získáte cenu a další informace.

Poptávka

Klikněte a odešlete svůj dotaz a my se vám ozveme zpět do jednoho pracovního dne

Detail produktu

Poznámky k aplikaci

Hodnocení zákazníků

Štítky produktu

Popis výrobku

Phanta Max přidal jedinečné elongační faktory, faktory podporující specificitu a faktory neinhibující plató, což výrazně zlepšuje schopnost amplifikace dlouhých fragmentů, amplifikační specificitu a výtěžek amplifikace.Pomocí jednoduchých templátů, jako je λDNA a plazmidy, může Phanta Max efektivně amplifikovat fragmenty až do 40 kb;pomocí komplexních templátů, jako je genomová DNA, může Phanta Max efektivně amplifikovat fragmenty až do 20 kb;pomocí cDNA templátů, Phanta Max Dokáže efektivně amplifikovat fragmenty až do 10 kb.Její chybovost amplifikace je 1/128 u konvenční polymerázy Taq a 1/6 u polymerázy Pfu.Phanta Max má navíc dobrou odolnost vůči inhibitorům PCR a lze jej použít pro přímou PCR vzorků bakterií, hub, rostlinných tkání, živočišných tkání nebo vzorků plné krve.Phanta Max obsahuje dvě monoklonální protilátky, které mohou inhibovat její 5' → 3' polymerázovou aktivitu a 3' → 5' exonukleázovou aktivitu při pokojové teplotě, což umožňuje vysoce specifickou hot-start PCR.Tento produkt obsahuje Phanta Max Super-Fidelity DNA polymerázu, dNTP a optimalizovaný systém pufrů.K provedení amplifikace potřebuje pouze přidat primery a templáty, což snižuje pipetovací operace a zlepšuje propustnost detekce a reprodukovatelnost výsledků.Ochranný prostředek přidaný do systému umožňuje 2 × Master mixu udržovat stabilní aktivitu po opakovaném zmrazování a rozmrazování.Souprava obsahuje nanášecí barvivo, které lze po reakci přímo tečkovat pro elektroforézu.Enzym má 5'→3'polymerázovou aktivitu a 3'→5'exonukleázovou aktivitu a amplifikovaný produkt má tupé konce, vhodný pro klonovací soupravy ClonExpress a TOPO (C112/C113/C115/C601).

Vlastnosti produktu

Super věrnost:Věrnost je 128krát vyšší než u Taq DNA polymerázy;
Rychlejší zesílení:Limitní rychlost může dosáhnout 0,5 s/kb, 30 s/kb může efektivně zesílit většinu fragmentů;
Delší zesílení:Efektivní délka amplifikace jednoduchých templátů, jako je plazmid a λ DNA, může dosáhnout 40 kb, efektivní délka amplifikace cDNA může dosáhnout 10 kb a efektivní délka amplifikace genomu může dosáhnout 20 kb;
Široká přizpůsobivost:Je vhodný pro amplifikaci různých fragmentů obsahu GC, má super toleranci k inhibitorům PCR a lze jej použít pro přímou PCR různých vzorků.

Citace

Li, Yufeng a kol."DRAK2 zhoršuje progresi nealkoholického ztučnění jater prostřednictvím alternativního sestřihu RNA spojeného se SRSF6."Buněčný metabolismus 33.10 (2021): 2004-2020.

Gu, Haiyan a kol."PCBP2 udržuje homeostázu antivirové signalizace regulací enzymatické aktivity cGAS prostřednictvím antagonizace jeho kondenzace."Nature communications 13.1 (2022): 1-16.

Chen, Weizhong a kol."Cílený genetický screening u bakterií s Cas12k řízenou transpozázou."Cell Reports 36.9 (2021): 109635.

Chen, Lili a kol."Únikové řízení pomocí cholecystokininové peptidergní signalizace."Cell Reports 38.6 (2022): 110330.

FAQ

Q1: Účinnost zesílení je nízká a v testovací skupině nejsou žádná zesílená pásma.

A1: (1) Primery

Zkontrolujte, zda syntetické primery neznehodnotily v důsledku nesprávného skladování;zkontrolujte návrh primeru a použijte BLAST k prozkoumání specifičnosti primeru nebo redesign primerů.

(2) Šablona

Dlouhodobé skladování nebo opakované cykly zmrazování a rozmrazování povedou k rozbití DNA, poškrábání nebo degradaci, takže templátem by měla být čerstvě připravená dvouvláknová DNA.Příliš vysoký obsah GC v templátu znesnadní separaci dvouřetězců DNA;v tomto případě přidejte PCR Enhancer (kat. č. P021), abyste účinně snížili teplotu tání.Šablony surových vzorků mohou obsahovat inhibitory, proto se doporučuje snížit koncentraci templátu (použijte po naředění; pokud je použit list rostliny, ujistěte se, že rostlina není bohatá na polysacharidy nebo polyfenoly, vezměte čerstvý, mladý list a ořízněte jej do velikosti konce žluté špičky pipety).Pokud je použita cDNA, zkontrolujte čistotu a integritu RNA použité pro reverzní transkripci.

(3) Enzym

Enzym použitý v reakci byl inaktivován.Opakujte experiment s čerstvým enzymem nebo enzymem z jiného zdroje.

(4) Systém zesílení

Reakční systém byl špatně připraven.Opakujte experiment se správným systémem.

(5) Program reakce

Zkontrolujte, zda je teplota denaturace správná a zda je teplota zobrazená na systému PCR stejná jako skutečná teplota.Pokud je teplota příliš vysoká, enzym bude v prvních několika cyklech rychle inaktivován.Pokud je teplota příliš nízká, šablona nebude zcela denaturována.Pokud jsou jako šablona použity kvasinky, může být doba předdenaturace prodloužena na 10 minut.Pokud je teplota žíhání nevhodná, určete vhodnou teplotu žíhání testováním gradientu teplot žíhání.Pokud je cílový fragment dlouhý, vyzkoušejte program touchdown PCR.Zkontrolujte, zda je doba prodloužení dostatečná.

 

Q2: Zesílené pásy jsou slabé.

A2: (1) Primery

Zkontrolujte, zda nedošlo k degradaci syntetických primerů.

(2) Šablona

Zkontrolujte kvalitu šablony.Dlouhodobé skladování nebo opakované cykly zmrazování a rozmrazování povedou k rozbití DNA, poškrábání nebo degradaci, takže jako templát by měla být použita čerstvě připravená dvouvláknová DNA.Pokud byla šablona spotřebována, použijte sériová ředění produktu počáteční amplifikace jako šablony pro následnou amplifikaci.

(3) Program reakce

Vyzkoušejte program touchdown PCR;prodlužte dobu prodloužení a počet cyklů.

 

Q3: Specificita amplifikace je nízká nebo existují nespecifické produkty.

A3: (1) Primery

Návrh základního nátěru není optimální.Pokud se primery navázaly na nespecifická místa v cílové sekvenci nebo k sobě navzájem, aby vytvořily dimery, proveďte optimalizaci snížením koncentrace primeru nebo přepracováním primerů, je-li to nutné.

(2) Šablona

Pokud je šablona znečištěná nebo znečištěná, připravte novou šablonu.

Pokud templát degradoval nebo bylo použito příliš mnoho templátu, zkontrolujte integritu a koncentraci templátu elektroforézou a v případě potřeby templát znovu vyčistěte.Množství vstupní šablony naleznete v návodu k použití.

(3) Program reakce

Reakční program není optimální.Pokud existují nespecifické různé pásy menší než cílové pásmo, zvyšte teplotu žíhání a snižte počet cyklů.Pokud existují nespecifická různá pásma větší než cílové pásmo, zkraťte dobu prodloužení a počet cyklů.

 

Q4: Proužky jsou difuzní nebo rozmazané, když jsou amplifikační produkty naneseny na gel.

A4: (1) Gel

Během přípravy gel zcela rozpusťte.

(2) Základní nátěry

Zkontrolujte, zda nedošlo k degradaci primerů.

(3) Šablona

Šablona je poškozená nebo přebytečná.Prověřte integritu a koncentraci templátu elektroforézou a v případě potřeby připravte nový templát.Množství vstupní šablony naleznete v návodu k použití.Pokud je cílový pás dlouhý a cDNA je použita jako templát, zkontrolujte čistotu a integritu RNA použité pro reverzní transkripci a proveďte reverzní transkripci znovu bez náhodných primerů.

(4) Program reakce

Reakční program není optimální.Pokud je teplota žíhání nevhodná, určete vhodnou teplotu žíhání testováním gradientu teplot žíhání.Vyzkoušejte program touchdown PCR.

 

Q5: Ve skupině blank control (NTC) jsou amplifikační produkty.

A5: (1) Problematický návrh primeru

Amplifikovaná sekvence je homologní s necílovou sekvencí.V PCR jsou tedy také amplifikovány necílové sekvence.

(2) Pokud má pás odpovídající amplifikačnímu produktu stejnou velikost jako cílové pásy, znamená to kontaminaci.

Opakujte experiment s čerstvou směsí, vodou nebo primery.Připravte reakční systém na ultračistém pracovním stole, abyste minimalizovali kontaminaci aerosolem.

(3) Abyste zabránili zkřížené kontaminaci cílové sekvence genomem nebo velkými fragmenty, provádějte kroky opatrně, abyste zabránili napipetování cílové sekvence do plnicí pipety nebo rozlití z centrifugačních zkumavek.

(4) Abyste se vyhnuli kontaminaci cílového genu malými vzduchem přenášenými fragmenty nukleové kyseliny, použijte ke snížení nebo odstranění kontaminace metodu nested PCR.

 

Q6: Vysoce věrná polymeráza má nízkou věrnost a zavádí mutace.

A6: Mutace ve vysoce věrné PCR mohou být analyzovány z následujících hledisek:

(1) V šabloně jsou mutace.

Zkontrolujte, zda není šablona zmutovaná.Pokud se jedná o plazmid, odešlete jej k sekvenování.Pokud se jedná o cDNA, opakujte test;pokud je mutace stále přítomná, mohou být problémy s cDNA.V tomto případě se doporučuje připravit nové cDNA po kontrole integrity a čistoty RNA.

(2) Mutace může být důsledkem dlouhodobé expozice templátu UV záření.

Během extrakce gelu se vyhněte dlouhodobému vystavení UV záření.

(3) Genová sekvence je nekonzistentní se sekvencí NCBI.

Znovu odešlete DNA k sekvenování.Pokud výsledek zůstane stejný, znamená to, že sekvence může být nekonzistentní se sekvencí uvedenou na NCBI.

(4) Podobné rekombinantní sekvence vedou k nesprávné rekombinaci.

 

Otázka 7: Kolik templátů by mělo být vloženo, pokud je produkt reverzní transkripce cDNA použit jako templát pro vysoce věrnou PCR?

A7: Vstupní množství templátu cDNA doporučené v návodu k použití je 1–5 μl (ne více než 1/10 celkového objemu systému PCR).Určete vhodné vstupní množství testováním různých množství šablon v tomto rozsahu.

 

Q8: Ovlivňují obarvené produkty PCR restrikční trávení?

A8: Testy ukazují, že obarvené produkty PCR neovlivňují restrikční štěpení.

 

Q9: Mají amplifikační produkty získané pomocí vysoce věrných polymeráz poly(A) konce?Jak přidat poly(A) ocasy?

A9: (1) Produkty amplifikace získané pomocí vysoce věrných polymeráz nemají poly(A) konce.Pro následné klonování vyzkoušejte bezproblémový klonovací produkt Vazyme C601;pro klonování TA přidejte poly(A) ocas pomocí univerzální polymerázy Taq:

Metoda Poly(A) chvostu: 10 μl systém pouze s Taq polymerázou:

1 μl 10× pufru Taq (obsahujícího MgCl2)

0,5 ul 10 mM dNTP

0,2 μl Taq DNA polymerázy (neobsahující žádné primery)

1 – 7 μl purifikovaných PCR fragmentů

Přidejte ddH2O až 10 μl

Systém míchání Taq:

2 × Taq Master Mix 5 μl

Purifikované fragmenty PCR 1 – 7 μl

ddH2O 10 μl

Reakční podmínky: 72 °C 10 min.

Kočka.Ne.:
--- Prosím vyberte ---

Aplikační poznámky Abstrakt

Přečtěte si více

Napište recenzi zde:

  • 1 hvězdička2 hvězdičky3 hvězdičky4 hvězdičky5 hvězd(Zatím bez hodnocení)
    Načítání ...Načítání ...

  • 6 ×= čtyřicet dva

    Štítky:, , , , , , , , ,

    Zákazníci také koupili: